Johan Dahlin
2e231ec64c
All checks were successful
Deploy Quartz site to GitHub Pages / build (push) Successful in 2m48s
90 lines
2.2 KiB
Markdown
90 lines
2.2 KiB
Markdown
---
|
||
tags:
|
||
- biokemi
|
||
- rekombinant-dna-teknik
|
||
- anteckningar
|
||
föreläsare: Oliver Forsell
|
||
date: 2025-11-26
|
||
---
|
||
Sätter dit en prime av intresse, restriktionssite. En insert som med hjälp av restriktionsenzym kan kapa och får en sticky ends.
|
||
|
||
self-ligated vector, plasmiden binder till sig själv, isolera med blue/white.
|
||
|
||
ampicillin?
|
||
x-gal?
|
||
iptg? lacz-alpha restriction, sitter ett repressionprotein, iptg inaktiverar en repressor
|
||
AmpR: ampicillin restistans
|
||
pellet?
|
||
supernatant: det som hamnar ovanpå
|
||
nukleasfritt vatten
|
||
kilator? ko-faktor för vatten
|
||
RnasaA: bryter ner RNA
|
||
SDS löser upp fosfolipider och proteiner i cellmembranet
|
||
eulera
|
||
SYBR safe
|
||
|
||
|
||
|
||
---
|
||
|
||
Dagens labb
|
||
|
||
# Rena fram plasmiden
|
||
|
||
# Klippar ur genen av intresse
|
||
|
||
# Kör agarose gel
|
||
|
||
# Tolka resultatet
|
||
|
||
|
||
|
||
----
|
||
|
||
### What are the sites the plasmid contains that allow for this experiment?
|
||
- Lacz
|
||
- Β-lactamas (ampicilin resistansen)
|
||
- BamH-insertion site, i vårta multiple cloning site
|
||
- Origin of replication för att kunna replikera
|
||
|
||
#### What are the 3 compounds in the LB plates that allow for selection of bacteria with plasmid and the distinction of plasmids with and without the inserted gene?
|
||
- IPTG
|
||
- X-Gal
|
||
- Ampicillin
|
||
|
||
### What are the six steps in plasmid preparation and purification?
|
||
1. Pelleteringen
|
||
2. **Suspendera**, lösa upp pelleten
|
||
3. **Lysering** - så det läcker ut plasmid
|
||
4. **Neutralisera** - skyddar plasmiden på nytt
|
||
5. **Skölja bort salter**
|
||
6. Tillsätta vatten för att eulera ut vår plasmid
|
||
|
||
|
||
### What is a restriction enzyme and why was it used in this experiment?
|
||
|
||
Hjälpa till att klippa ut genen och foga in vår plasmid, sticky ends
|
||
|
||
|
||
### Explain the principle of Gel Electrophoresis, what is it for?
|
||
|
||
Separation av storlek eller massa på våra DNA-fragment. Elektrostatiskt repulsion, som får våra joner att separeras
|
||
|
||
### What´s the compound that allows for the visualization of the DNA in the gel?
|
||
|
||
SYBR safe
|
||
|
||
### How many times does BamHI cut the plasmid without the insert? And the plasmid with the insert?
|
||
|
||
Hur många gånger kommer BamHI klippa vår plasmed
|
||
- utan insert: 1
|
||
- med insert: 2 på var sin sida om inserten för att få ut den
|
||
|
||
### Explain the different plasmid conformations that exist.
|
||
|
||
- relaxed
|
||
- supercoiled supper snabbt, de är tvinnade
|
||
- linjära
|
||
-
|
||
|