---
tags:
  - biokemi
  - rekombinant-dna-teknik
  - anteckningar
föreläsare: Oliver Forsell
date: 2025-11-26
---
Sätter dit en prime av intresse, restriktionssite. En insert som med hjälp av restriktionsenzym kan kapa och får en sticky ends.

self-ligated vector, plasmiden binder till sig själv, isolera med blue/white.

ampicillin?
x-gal?
iptg? lacz-alpha restriction, sitter ett repressionprotein, iptg inaktiverar en repressor
AmpR: ampicillin restistans
pellet?
supernatant: det som hamnar ovanpå
nukleasfritt vatten
kilator? ko-faktor för vatten
RnasaA: bryter ner RNA
SDS löser upp fosfolipider och proteiner i cellmembranet
eulera
SYBR safe



---

Dagens labb

# Rena fram plasmiden

# Klippar ur genen av intresse

# Kör agarose gel

# Tolka resultatet



----

### What are the sites the plasmid contains that allow for this experiment? 
- Lacz
- Β-lactamas (ampicilin resistansen)
- BamH-insertion site, i vårta multiple cloning site
- Origin of replication för att kunna replikera

#### What are the 3 compounds in the LB plates that allow for selection of bacteria with plasmid and the distinction of plasmids with and without the inserted gene?
- IPTG
- X-Gal
- Ampicillin

### What are the six steps in plasmid preparation and purification? 
1. Pelleteringen
2. **Suspendera**, lösa upp pelleten
3. **Lysering** - så det läcker ut plasmid
4. **Neutralisera** - skyddar plasmiden på nytt
5. **Skölja bort salter**
6. Tillsätta vatten för att eulera ut vår plasmid


### What is a restriction enzyme and why was it used in this experiment? 

Hjälpa till att klippa ut genen och foga in vår plasmid, sticky ends


### Explain the principle of Gel Electrophoresis, what is it for? 

Separation av storlek eller massa på våra DNA-fragment. Elektrostatiskt repulsion, som får våra joner att separeras

### What´s the compound that allows for the visualization of the DNA in the gel?

SYBR safe

### How many times does BamHI cut the plasmid without the insert? And the plasmid with the insert? 

Hur många gånger kommer BamHI klippa vår plasmed
- utan insert: 1  
- med insert: 2 på var sin sida om inserten för att få ut den

### Explain the different plasmid conformations that exist.

- relaxed
- supercoiled supper snabbt, de är tvinnade
- linjära
-