diff --git a/content/Biokemi/Plasmidlabb/Rekombinant del II.md b/content/Biokemi/Plasmidlabb/Rekombinant del II.md new file mode 100644 index 0000000..6302cc9 --- /dev/null +++ b/content/Biokemi/Plasmidlabb/Rekombinant del II.md @@ -0,0 +1,89 @@ +--- +tags: + - biokemi + - rekombinant-dna-teknik + - anteckningar +föreläsare: Oliver Forsell +date: 2025-11-26 +--- +Sätter dit en prime av intresse, restriktionssite. En insert som med hjälp av restriktionsenzym kan kapa och får en sticky ends. + +self-ligated vector, plasmiden binder till sig själv, isolera med blue/white. + +ampicillin? +x-gal? +iptg? lacz-alpha restriction, sitter ett repressionprotein, iptg inaktiverar en repressor +AmpR: ampicillin restistans +pellet? +supernatant: det som hamnar ovanpå +nukleasfritt vatten +kilator? ko-faktor för vatten +RnasaA: bryter ner RNA +SDS löser upp fosfolipider och proteiner i cellmembranet +eulera +SYBR safe + + + +--- + +Dagens labb + +# Rena fram plasmiden + +# Klippar ur genen av intresse + +# Kör agarose gel + +# Tolka resultatet + + + +---- + +### What are the sites the plasmid contains that allow for this experiment? +- Lacz +- Β-lactamas (ampicilin resistansen) +- BamH-insertion site, i vårta multiple cloning site +- Origin of replication för att kunna replikera + +#### What are the 3 compounds in the LB plates that allow for selection of bacteria with plasmid and the distinction of plasmids with and without the inserted gene? +- IPTG +- X-Gal +- Ampicillin + +### What are the six steps in plasmid preparation and purification? +1. Pelleteringen +2. **Suspendera**, lösa upp pelleten +3. **Lysering** - så det läcker ut plasmid +4. **Neutralisera** - skyddar plasmiden på nytt +5. **Skölja bort salter** +6. Tillsätta vatten för att eulera ut vår plasmid + + +### What is a restriction enzyme and why was it used in this experiment? + +Hjälpa till att klippa ut genen och foga in vår plasmid, sticky ends + + +### Explain the principle of Gel Electrophoresis, what is it for? + +Separation av storlek eller massa på våra DNA-fragment. Elektrostatiskt repulsion, som får våra joner att separeras + +### What´s the compound that allows for the visualization of the DNA in the gel? + +SYBR safe + +### How many times does BamHI cut the plasmid without the insert? And the plasmid with the insert? + +Hur många gånger kommer BamHI klippa vår plasmed +- utan insert: 1 +- med insert: 2 på var sin sida om inserten för att få ut den + +### Explain the different plasmid conformations that exist. + +- relaxed +- supercoiled supper snabbt, de är tvinnade +- linjära +- +